气相色谱法测定佛山人参再造丸中龙脑的含量
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【摘要】 目的 建立气相色谱法测定佛山人参再造丸中龙脑含量的方法。方法 采用HP5石英毛细管柱（5% phenyl methyl siloxane）（30.0 m×320 nm×0.25 μm）,柱温为110 ℃,进样口温度为180 ℃,检测器温度为250 ℃, 载气为氮气。结果 龙脑检测质量浓度在6.875～220.00 μg/mL (r=0.9999,n=6)范围内线性关系良好,平均回收率为98.59%(RSD=1.52%)。
【关键词】 气相色谱法；佛山人参再造丸；龙脑；含量测定
Abstract:Objective To establish a method for content determination of borneol in Foshanrenshenzaizao pills. Method The sample was analyzed on an HP5 capillary column (5% phenyl methyl siloxane, 30.0 m×320 nm×0.25 μm) using nitrogen as carrier gas. The temperatures of the column, injector and detector were 110, 180 and 250 ℃, respectively.Result There was good linearity in the range of 6.88220.00 μg/mL (r=0.9999, n=6). The average recovery and relative standard deviation of borneol were 98.58% and 1.52%, respectively. Conclusion This method is simple, accurate and reproducible for the quality control of Foshanrenshenzaizao pill.
Key words:gas chromatography; Foshanrenshenzaizao pill; borneol
佛山人参再造丸是由人参、人工牛黄、血竭、当归、冰片(合成龙脑)、大黄等组成的复方制剂，具有祛风化淤、活血通络的功效，用于中风、步履艰难、口眼歪斜、手足痉挛、左瘫右痪、筋骨疼痛、半身不遂、言语不清［1］。处方中冰片(合成龙脑)是一味常用药，具有散郁火、清热、消肿等功效。冰片(合成龙脑)主要成分是互为异构体的龙脑和异龙脑，其化学结构无特征紫外吸收，因此薄层扫描法和气相色谱法［2－4］是测定这类化合物较好方法。本文建立气相色谱法测定佛山人参再造丸中龙脑的含量，方法简便，杂质无干扰，分离效果好，结果准确，可作为该制剂质量控制的方法之一。
1仪器与试药
Agilent HP6890气相色谱仪，HP Chemstatations工作站，FID检测器；CQ 250超声波处理器（上海,功率250 W，频率33 kHz）。
龙脑（中国药品生物制品检定所，批号：110881200504）,水杨酸甲酯（中国药品生物制品检定所，批号：7078702）,佛山人参再造丸共10批（佛山冯了性药业有限公司），所用的其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件与系统适用性试验
色谱柱为HP5石英毛细管柱（5% phenyl methyl siloxane）（30.0 m×320 nm×0.25 μm）,柱温为110 ℃,进样口温度为180 ℃,检测器温度为250 ℃,载气为高纯度氮气,分流比为20∶1，在上述色谱条件下,龙脑、水杨酸甲酯(内标)的理论塔板数均大于40 000。龙脑与水杨酸甲酯(内标)的分离度大于2。
2.2溶液的制备
2.2.1内标溶液的制备精密称取水杨酸甲酯适量, 置于1 000 mL容量瓶中，加入乙醇配制成浓度为0.130 0 mg/mL的溶液,摇匀,即得。
2.2.2对照品溶液制备精密称取龙脑对照品适量，置于100 mL容量瓶中，加上述内标溶液溶解并稀释至刻度，制成浓度为0.090 0 mg/mL的溶液,摇匀,即得。
2.2.3供试品溶液的制备取本品剪碎，取约2 g，精密称定，加硅藻土2 g研碎，置于具塞锥形瓶中，精密加入上述内标溶液25 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用乙醇补足减少的重量，取续滤液，即得。
2.3测定方法
吸取对照品溶液按上述色谱条件注入气相色谱仪，测定龙脑和水杨酸甲酯峰面积，计算校正因子；吸取供试品溶液按上述色谱条件注入气相色谱仪，按内标法计算即得。
2.4线性关系考察
精密称取龙脑对照品适量，加上述内标溶液稀释至刻度，摇匀，制成浓度为220.00 μg/mL龙脑对照品溶液；精密吸取该对照品溶液5 mL置于10 mL的容量瓶中，加上述内标溶液稀释至刻度，摇匀，制成浓度为110.00 μg/mL龙脑对照品溶液；同上逐级用内标液稀释配制6个不同浓度梯度220.00、110.00、55.00、27.50、13.75、6.875 μg/mL的对照品溶液。吸取上述溶液,按上述色谱条件进样，记录其峰面积,并以龙脑质量浓度(ρ)为横坐标,龙脑峰面积与内标峰面积之比(A)为纵坐标,进行线性回归,得回归方程A=0.012 4ρ-0.015 1(r=0.999 9,n=6)。结果表明龙脑检测质量浓度在6.875～220.00 μg/mL范围内线性关系良好。
2.5阴性干扰的考察
取缺冰片的处方，按工艺制成阴性制剂，按“2.2.3”项方法加乙醇超声提取制得阴性对照溶液。分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件进样分析。结果表明其他味药及辅料对龙脑测定无干扰,见图1。
图1气相色谱图 略
2.6仪器精密度试验
取同一供试品溶液（批号为GC0007）按上述色谱条件重复进样6次，测定龙脑的含量,结果龙脑含量的RSD为1.02%，表明仪器精密度良好。
2.7稳定性试验
取同一供试品溶液，按上述色谱条件分别于0、1、2、4、6、8 h进样测定，计算龙脑峰面积与内标峰面积之比的RSD为1.69%。结果表明供试品溶液在8 h之内稳定。
2.8重复性试验
精密称取同一批号（批号为GC0007）的样品5份各2 g，按“2.2.3”项方法制得供试品溶液，测定每一份供试品含量，结果平均值为0.5972 mg/g,RSD=1.09%。结果表明本法重复性良好。
2.9加样回收率试验
取已测得含量的样品（批号为GC0007，龙脑质量比为0.597 2 mg/g）6份各1 g，精密称定，分别加入硅藻土1 g,研碎，各精密加入龙脑对照品溶液（质量浓度为0.6017 mg/mL）1 mL，按“2.2.3”项方法制得供试品溶液，测定，结果平均回收率为98.59%，RSD为1.52%。
2.10样品测定
取10批样品，分别按供试品的溶液制备方法制得供试品溶液，按“2.3”项测定，结果见表1。
表110批样品测定结果 略
3讨 论
3.1参考文献［2－4］提取溶剂选择有乙醇、乙酸乙酯和氯仿等，内标物的选择有萘和水杨酸甲酯。通过试验比较,加硅藻土研碎，乙醇为提取溶剂，超声提取（功率250 W，频率33 kHz），水杨酸甲酯为内标物，龙脑提取率明显提高，乙醇的毒性、刺激性较小、价格较低且水杨酸甲酯与龙脑都具有良好的分离度,故采用乙醇为提取溶剂、超声提取和水杨酸甲酯为内标物的方法。
3.2采用超声提取法，试用不同的提取时间（20 min、30 min、40 min）对样品进行提取，结果30 min与40 min样品的含量较大而且无明显差别，说明乙醇30 min的超声提取样品已经提取完全，为节约时间及节省成本，超声提取时间确定为30 min。
【参考文献】
［1］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂［D］.1994：113.
［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.北京：化工工业出版社，2005：358，433，570,617，666.
［3］ 魏学冰.气相色谱法测定肤疡软膏中冰片的含量［J］.中成药,2004,26(1):76.
［4］ 刘杰，董文玲.4种中药橡胶膏剂中樟脑、薄荷脑、冰片和水杨酸甲酯的气相色谱法测定［J］.中成药,2004,26(10):795.
【关键词】 气相色谱法；佛山人参再造丸；龙脑；含量测定
Abstract:Objective To establish a method for content determination of borneol in Foshanrenshenzaizao pills. Method The sample was analyzed on an HP5 capillary column (5% phenyl methyl siloxane, 30.0 m×320 nm×0.25 μm) using nitrogen as carrier gas. The temperatures of the column, injector and detector were 110, 180 and 250 ℃, respectively.Result There was good linearity in the range of 6.88220.00 μg/mL (r=0.9999, n=6). The average recovery and relative standard deviation of borneol were 98.58% and 1.52%, respectively. Conclusion This method is simple, accurate and reproducible for the quality control of Foshanrenshenzaizao pill.
Key words:gas chromatography; Foshanrenshenzaizao pill; borneol
佛山人参再造丸是由人参、人工牛黄、血竭、当归、冰片(合成龙脑)、大黄等组成的复方制剂，具有祛风化淤、活血通络的功效，用于中风、步履艰难、口眼歪斜、手足痉挛、左瘫右痪、筋骨疼痛、半身不遂、言语不清［1］。处方中冰片(合成龙脑)是一味常用药，具有散郁火、清热、消肿等功效。冰片(合成龙脑)主要成分是互为异构体的龙脑和异龙脑，其化学结构无特征紫外吸收，因此薄层扫描法和气相色谱法［2－4］是测定这类化合物较好方法。本文建立气相色谱法测定佛山人参再造丸中龙脑的含量，方法简便，杂质无干扰，分离效果好，结果准确，可作为该制剂质量控制的方法之一。
1仪器与试药
Agilent HP6890气相色谱仪，HP Chemstatations工作站，FID检测器；CQ 250超声波处理器（上海,功率250 W，频率33 kHz）。
龙脑（中国药品生物制品检定所，批号：110881200504）,水杨酸甲酯（中国药品生物制品检定所，批号：7078702）,佛山人参再造丸共10批（佛山冯了性药业有限公司），所用的其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件与系统适用性试验
色谱柱为HP5石英毛细管柱（5% phenyl methyl siloxane）（30.0 m×320 nm×0.25 μm）,柱温为110 ℃,进样口温度为180 ℃,检测器温度为250 ℃,载气为高纯度氮气,分流比为20∶1，在上述色谱条件下,龙脑、水杨酸甲酯(内标)的理论塔板数均大于40 000。龙脑与水杨酸甲酯(内标)的分离度大于2。
2.2溶液的制备
2.2.1内标溶液的制备精密称取水杨酸甲酯适量, 置于1 000 mL容量瓶中，加入乙醇配制成浓度为0.130 0 mg/mL的溶液,摇匀,即得。
2.2.2对照品溶液制备精密称取龙脑对照品适量，置于100 mL容量瓶中，加上述内标溶液溶解并稀释至刻度，制成浓度为0.090 0 mg/mL的溶液,摇匀,即得。
2.2.3供试品溶液的制备取本品剪碎，取约2 g，精密称定，加硅藻土2 g研碎，置于具塞锥形瓶中，精密加入上述内标溶液25 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用乙醇补足减少的重量，取续滤液，即得。
2.3测定方法
吸取对照品溶液按上述色谱条件注入气相色谱仪，测定龙脑和水杨酸甲酯峰面积，计算校正因子；吸取供试品溶液按上述色谱条件注入气相色谱仪，按内标法计算即得。
2.4线性关系考察
精密称取龙脑对照品适量，加上述内标溶液稀释至刻度，摇匀，制成浓度为220.00 μg/mL龙脑对照品溶液；精密吸取该对照品溶液5 mL置于10 mL的容量瓶中，加上述内标溶液稀释至刻度，摇匀，制成浓度为110.00 μg/mL龙脑对照品溶液；同上逐级用内标液稀释配制6个不同浓度梯度220.00、110.00、55.00、27.50、13.75、6.875 μg/mL的对照品溶液。吸取上述溶液,按上述色谱条件进样，记录其峰面积,并以龙脑质量浓度(ρ)为横坐标,龙脑峰面积与内标峰面积之比(A)为纵坐标,进行线性回归,得回归方程A=0.012 4ρ-0.015 1(r=0.999 9,n=6)。结果表明龙脑检测质量浓度在6.875～220.00 μg/mL范围内线性关系良好。
2.5阴性干扰的考察
取缺冰片的处方，按工艺制成阴性制剂，按“2.2.3”项方法加乙醇超声提取制得阴性对照溶液。分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件进样分析。结果表明其他味药及辅料对龙脑测定无干扰,见图1。
图1气相色谱图 略
2.6仪器精密度试验
取同一供试品溶液（批号为GC0007）按上述色谱条件重复进样6次，测定龙脑的含量,结果龙脑含量的RSD为1.02%，表明仪器精密度良好。
2.7稳定性试验
取同一供试品溶液，按上述色谱条件分别于0、1、2、4、6、8 h进样测定，计算龙脑峰面积与内标峰面积之比的RSD为1.69%。结果表明供试品溶液在8 h之内稳定。
2.8重复性试验
精密称取同一批号（批号为GC0007）的样品5份各2 g，按“2.2.3”项方法制得供试品溶液，测定每一份供试品含量，结果平均值为0.5972 mg/g,RSD=1.09%。结果表明本法重复性良好。
2.9加样回收率试验
取已测得含量的样品（批号为GC0007，龙脑质量比为0.597 2 mg/g）6份各1 g，精密称定，分别加入硅藻土1 g,研碎，各精密加入龙脑对照品溶液（质量浓度为0.6017 mg/mL）1 mL，按“2.2.3”项方法制得供试品溶液，测定，结果平均回收率为98.59%，RSD为1.52%。
2.10样品测定
取10批样品，分别按供试品的溶液制备方法制得供试品溶液，按“2.3”项测定，结果见表1。
表110批样品测定结果 略
3讨 论
3.1参考文献［2－4］提取溶剂选择有乙醇、乙酸乙酯和氯仿等，内标物的选择有萘和水杨酸甲酯。通过试验比较,加硅藻土研碎，乙醇为提取溶剂，超声提取（功率250 W，频率33 kHz），水杨酸甲酯为内标物，龙脑提取率明显提高，乙醇的毒性、刺激性较小、价格较低且水杨酸甲酯与龙脑都具有良好的分离度,故采用乙醇为提取溶剂、超声提取和水杨酸甲酯为内标物的方法。
3.2采用超声提取法，试用不同的提取时间（20 min、30 min、40 min）对样品进行提取，结果30 min与40 min样品的含量较大而且无明显差别，说明乙醇30 min的超声提取样品已经提取完全，为节约时间及节省成本，超声提取时间确定为30 min。
【参考文献】
［1］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂［D］.1994：113.
［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.北京：化工工业出版社，2005：358，433，570,617，666.
［3］ 魏学冰.气相色谱法测定肤疡软膏中冰片的含量［J］.中成药,2004,26(1):76.
［4］ 刘杰，董文玲.4种中药橡胶膏剂中樟脑、薄荷脑、冰片和水杨酸甲酯的气相色谱法测定［J］.中成药,2004,26(10):795.
