念珠菌显色培养基的临床应用评价
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【摘要】 目的 评价本实验室研制的显色培养基对临床念珠菌的检验效果及其应用价值。方法 用本实验室研制的念珠菌显色培养基与沙保罗琼脂培养基对93株临床分离株进行筛选，并比较两种培养基的分离效果。对在本实验室研制的念珠菌显色培养基和科玛嘉念珠菌显色培养基上生长良好的菌株进行初步鉴别，并与API鉴定结果做比较。结果 本实验室研制的念珠菌显色培养基的选择性明显优于传统的沙保罗琼脂培养基，特异性与科玛嘉的结果相一致。经API 20C AUX对可疑菌株进行鉴定，白色念珠菌符合率为95.2%，热带念珠菌的为100%，光滑念珠菌的为87.5%,克柔氏念珠菌的为100%,总符合率为94.6%。结论 本实验室研制的念珠菌显色培养基具有特异性高、选择性强的特点，能快速、简便地初步鉴别临床常见念珠菌，适合用于临床样本中念珠菌的检测。
【关键词】 显色培养基 念珠菌 临床应用
【Abstract】 Objective To evaluate the effect and value of chromogenic Candida medium(HKMCC)developed in our laboratory. Methods Compare the separation of HKMCC with sabouraud culture medium(SDA) with 96 clinical isolated strains. Then use API identification system for identifying doubtful strains from two chromogenic media. Results The selectivity of HKMCC was better than that of SDA; the specificity of HKMCC was as same as CHROMagarCC; The matches rate of HKMCC Compared with the results of API 20C AUX, C.albicans was 95.2%,C.tropicalis was100%,C.glabrata was 87.5%,C.krusei was 100%, the total coincidence rate was 94.6%. Conclusion Chromogenic Candida medium has a good prospect in applying clinical samples of Candida, because it has high specificity and selectivity.
【keywords】 chromogenic medium Candida clinical application
念珠菌（Candida）是临床标本中最常见的真菌，该菌可引起皮肤粘膜浅层或全身系统性感染，而且引起的感染每年都有增多的趋势。因而对念珠菌做出快速鉴定十分重要。如今对临床菌种鉴定的要求越来越趋向于程序简单化，甚至能用一种鉴定方法鉴定出尽可能多的菌种。而念珠菌显色培养基可从临床标本中分离和初步鉴别出白色念珠菌(candida albicans)、克柔氏念珠菌(C.tropicalis)、光滑念珠菌(C.glabrata)和热带念珠菌(C.krusei)，且能够缩短以上几种菌的培养时间，同时对标本中杂菌抑制作用上明显优于沙保琼脂培养基[1]。为探讨显色法的实用价值，本实验室用研制的念珠菌显色培养基对93株临床分离株进行测试，并与沙保罗是琼脂培养基和科玛嘉念珠菌显色培养基比较，并用API 20C AUX对可疑分离株进行鉴定，为念珠菌显色培养基的应用提供借鉴。
1 材料和方法
1.1材料
1.1.1 样本来源
93株临床分离株来自于广州肿瘤医院的样本
1.1.2 培养基及试剂
念珠菌显色培养基 本实验室研制
科玛嘉念珠菌显色培养基 法国科玛嘉公司
沙保罗琼脂培养基 OXOID公司
API 20 C AUX鉴定条、API 20 E鉴定条 法国生物梅里埃公司
1.2 方法
1.2.1 沙保罗琼脂培养基、本实验室研制念珠菌显色培养基及科玛嘉念珠菌显色培养基均按说明书配制。
1.2.2 将分离菌株分别划线接种到沙保罗琼脂培养基和本实验室研制的念珠菌显色培养基上，30℃培养48 h后观察菌落的生长情况。
1.2.3将在沙保罗琼脂培养基中生长，而在本实验室显色培养基受抑制的20株菌株进行革兰氏染色及用适宜的API鉴定条进行鉴定。
1.2.4 将显色培养基上分离培养的念珠菌疑似样本，挑取单菌落分别划线接种于本实验室研制的和科玛嘉的显色培养基中，30℃中培养48 h，观察菌落特征。
表1结果的判读表
Table 1 Interpretation table of results
1.2.5 同时将显色培养基上分离培养的念珠菌稀释成2麦氏浊度的菌悬液，按照API 20C AUX的说明书进行操作，30℃孵育48～72h读取结果，用ATBCIRS软件自动处理编码得出念珠菌菌名。
2 结果
2.1 显色培养基的分离效果
沙保罗琼脂培养基及本实验室研制的显色培养基分离效果如表2所示。在沙保罗琼脂培养基中生长，而在本实验室显色培养基受抑制的20株菌株经过革兰氏染色后发现均为革兰氏阴性菌杆菌，选用API 20 E对其进行鉴定，结果如表3所示，这些菌株均为肠杆菌科的细菌，而非念珠菌，在沙保罗琼脂培养基上表现为假阳性，而在本实验室研制的显色培养基上得到了很好的抑制。表明显色培养基的选择性明显优于沙保罗琼脂培养基。
表2 两种培养基分离效果比较
Table 2 the separation of two media
表3 20株菌的API鉴定结果
2.2 显色培养基的特异性及符合率试验
本实验室研制的显色培养基和科玛嘉显色培养基在初步鉴别念珠菌种上的效果相同，37株菌与API鉴定的总符合率能达到94.6%。经显色培养基初步鉴别为白色念珠菌的21株菌，除1株被API鉴定为葡萄牙念珠菌外，其余20株均被鉴定为白色念珠菌，符合率为95.2%；经显色培养基初步鉴别为为光滑念珠菌的8株菌，除1株被API鉴定为挪威念珠菌外，其余7株均被鉴定为光滑念珠菌，符合率为87.5%；而热带念珠菌和克柔氏念珠菌在显色培养基上初步鉴别的结果与API鉴定符合率均达到100%。表明显色培养基对念珠菌各种的初步鉴别的特异性很高。
表4 三种方法结果比较
Table 4 The Results of three methods
3 讨论
对念珠菌建立起鉴别性显色快速检测技术, 实现对致病菌的快速检测, 可以大大地降低工作量、节省人力和物力, 因而在临床疾病诊断中对提高检测样本效率具有十分重要的意义。目前, 国内外已有不少应用显色培养基进行致病菌分离的文献报导 [2-4]。
临床上最常见的4种念珠菌白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌和克柔氏念珠菌占念珠菌总数的95.3%[5], 而深部真菌感染中念珠菌的比例高达87.5%～94.5%[6-7]。本实验室研制的显色培养基鉴定的37 株念珠菌中白色念珠菌占20 株（54.1%）,在念珠菌中所占比例最高，与国内相关报道相似[8]。热带念珠菌6株（16.2%）、 光滑念珠菌7 株（18.9%）、克柔念珠菌2 株（5.4%）。四种念珠菌占鉴定总株数的94.6%。
已有文献指出，沙保罗培养基用于念珠菌菌检测容易造成漏检或误检[9]。本次研究发现有20株在念珠菌显色培养基受抑制的菌株在沙保罗琼脂培养基上有生长，经过API鉴定都为肠杆菌科的菌株。沙保罗琼脂培养基容易受到肠杆菌科的杂菌干扰造成假阳性的现象与黄晓燕等[10]的研究结果相符。从比较的结果可以看出，念珠菌显色培养基的选择性明显优于沙保罗琼脂培养基。
念珠菌生长较慢，传统的鉴定方法比较繁琐，需时较长且准确率不高，而采用API鉴定条等自动或半自动方法虽能将菌鉴定到种，但价格比较昂贵，不适合中小型医院及检验机构的大量使用。而本实验室研制的念珠菌显色培养基中含有多种酶底物，可分别与白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔氏念珠菌的不同酶类作用，从而呈现不同的颜色反应，达到在分离菌株的同时还可以对以上4种菌进行初步鉴别。与科玛嘉念珠菌显色培养基的比对显示两者的效果相当，均优于沙保罗琼脂培养基（不能区分念珠菌的各个种）。另外，显色培养基对念珠菌的初步鉴别需时约48h，而传统分离鉴定方法需要3～5天出报告，因而显色培养法能及时给临床治疗提供依据，对由念珠菌感染引起的疾病治疗具有重要意义，同时显色培养法鉴别符合率高，大幅度减少后续鉴定工作，而且该培养基制备简单，使用方便，价格相对便宜，适合在基层单位推广。
参考文献
[1] Odds FC. Bernaerts R CHRuadar Candida, a New differential isolation medium for presumptive identification of chinicauy important candida species. J Clin Uicrob Aug, 1994, 1923-1929
[2] Baumgartner, C., A. M. Freydiere, Y. Gille. Direct identification and recognition of yeast species from clinical material by using Albicans ID and CHROMagar Candida plates[J]. J. Clin. Microbiol. 1996, 34 (2): 454-456
[3] 卢勉飞, 吴清平, 刘云林, 等. 特异性酶反应在食源性致病菌检测中的应用[J]. 中国卫生检验杂志, 2005, 15(3): 354-356
[4] 卢勉飞, 蔡芷荷, 吴清平, 等. 一种副溶血性弧菌显色培养基的应用[J]. 微生物学通报, 2010, 37(5): 701-7076
[5] 周广, 谢宏元, 王知秋. 科玛嘉念珠菌显色培养基与API鉴定念珠菌的比较分析[J].川北医学院学报, 2004,19(1):96-97
[6] 李云, 朱媛媛, 李雪梅. 350株念珠菌的分离鉴定及结果分析[J]. 中华医院感染学杂志, 2003,13(2):200-200
[7] 李峰, 郭辉, 郑照军. 科玛嘉念珠菌显色培养基的临床应用评价[J].实用全科医学, 2006,4(4):476-477
[8] 沈洁, 吴建华, 王英, 等. 科玛嘉念珠菌显色培养基快速鉴定酵母菌2485株[J]. 第二军医大学学报, 2007,28(3):337-338
[9] 朱波, 彭宇生, 王鹏. 科玛嘉念珠菌显色培养基的临床应用评价[J]. 泸州医学院学报, 2009(4): 418-420
[10] 黄晓燕, 刘海英, 王露露. CHROMagar念珠菌显色培养基细菌干扰分析[J]. 广东医学, 2006(6): 906-907
【关键词】 显色培养基 念珠菌 临床应用
【Abstract】 Objective To evaluate the effect and value of chromogenic Candida medium(HKMCC)developed in our laboratory. Methods Compare the separation of HKMCC with sabouraud culture medium(SDA) with 96 clinical isolated strains. Then use API identification system for identifying doubtful strains from two chromogenic media. Results The selectivity of HKMCC was better than that of SDA; the specificity of HKMCC was as same as CHROMagarCC; The matches rate of HKMCC Compared with the results of API 20C AUX, C.albicans was 95.2%,C.tropicalis was100%,C.glabrata was 87.5%,C.krusei was 100%, the total coincidence rate was 94.6%. Conclusion Chromogenic Candida medium has a good prospect in applying clinical samples of Candida, because it has high specificity and selectivity.
【keywords】 chromogenic medium Candida clinical application
念珠菌（Candida）是临床标本中最常见的真菌，该菌可引起皮肤粘膜浅层或全身系统性感染，而且引起的感染每年都有增多的趋势。因而对念珠菌做出快速鉴定十分重要。如今对临床菌种鉴定的要求越来越趋向于程序简单化，甚至能用一种鉴定方法鉴定出尽可能多的菌种。而念珠菌显色培养基可从临床标本中分离和初步鉴别出白色念珠菌(candida albicans)、克柔氏念珠菌(C.tropicalis)、光滑念珠菌(C.glabrata)和热带念珠菌(C.krusei)，且能够缩短以上几种菌的培养时间，同时对标本中杂菌抑制作用上明显优于沙保琼脂培养基[1]。为探讨显色法的实用价值，本实验室用研制的念珠菌显色培养基对93株临床分离株进行测试，并与沙保罗是琼脂培养基和科玛嘉念珠菌显色培养基比较，并用API 20C AUX对可疑分离株进行鉴定，为念珠菌显色培养基的应用提供借鉴。
1 材料和方法
1.1材料
1.1.1 样本来源
93株临床分离株来自于广州肿瘤医院的样本
1.1.2 培养基及试剂
念珠菌显色培养基 本实验室研制
科玛嘉念珠菌显色培养基 法国科玛嘉公司
沙保罗琼脂培养基 OXOID公司
API 20 C AUX鉴定条、API 20 E鉴定条 法国生物梅里埃公司
1.2 方法
1.2.1 沙保罗琼脂培养基、本实验室研制念珠菌显色培养基及科玛嘉念珠菌显色培养基均按说明书配制。
1.2.2 将分离菌株分别划线接种到沙保罗琼脂培养基和本实验室研制的念珠菌显色培养基上，30℃培养48 h后观察菌落的生长情况。
1.2.3将在沙保罗琼脂培养基中生长，而在本实验室显色培养基受抑制的20株菌株进行革兰氏染色及用适宜的API鉴定条进行鉴定。
1.2.4 将显色培养基上分离培养的念珠菌疑似样本，挑取单菌落分别划线接种于本实验室研制的和科玛嘉的显色培养基中，30℃中培养48 h，观察菌落特征。
表1结果的判读表
Table 1 Interpretation table of results
1.2.5 同时将显色培养基上分离培养的念珠菌稀释成2麦氏浊度的菌悬液，按照API 20C AUX的说明书进行操作，30℃孵育48～72h读取结果，用ATBCIRS软件自动处理编码得出念珠菌菌名。
2 结果
2.1 显色培养基的分离效果
沙保罗琼脂培养基及本实验室研制的显色培养基分离效果如表2所示。在沙保罗琼脂培养基中生长，而在本实验室显色培养基受抑制的20株菌株经过革兰氏染色后发现均为革兰氏阴性菌杆菌，选用API 20 E对其进行鉴定，结果如表3所示，这些菌株均为肠杆菌科的细菌，而非念珠菌，在沙保罗琼脂培养基上表现为假阳性，而在本实验室研制的显色培养基上得到了很好的抑制。表明显色培养基的选择性明显优于沙保罗琼脂培养基。
表2 两种培养基分离效果比较
Table 2 the separation of two media
表3 20株菌的API鉴定结果
2.2 显色培养基的特异性及符合率试验
本实验室研制的显色培养基和科玛嘉显色培养基在初步鉴别念珠菌种上的效果相同，37株菌与API鉴定的总符合率能达到94.6%。经显色培养基初步鉴别为白色念珠菌的21株菌，除1株被API鉴定为葡萄牙念珠菌外，其余20株均被鉴定为白色念珠菌，符合率为95.2%；经显色培养基初步鉴别为为光滑念珠菌的8株菌，除1株被API鉴定为挪威念珠菌外，其余7株均被鉴定为光滑念珠菌，符合率为87.5%；而热带念珠菌和克柔氏念珠菌在显色培养基上初步鉴别的结果与API鉴定符合率均达到100%。表明显色培养基对念珠菌各种的初步鉴别的特异性很高。
表4 三种方法结果比较
Table 4 The Results of three methods
3 讨论
对念珠菌建立起鉴别性显色快速检测技术, 实现对致病菌的快速检测, 可以大大地降低工作量、节省人力和物力, 因而在临床疾病诊断中对提高检测样本效率具有十分重要的意义。目前, 国内外已有不少应用显色培养基进行致病菌分离的文献报导 [2-4]。
临床上最常见的4种念珠菌白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌和克柔氏念珠菌占念珠菌总数的95.3%[5], 而深部真菌感染中念珠菌的比例高达87.5%～94.5%[6-7]。本实验室研制的显色培养基鉴定的37 株念珠菌中白色念珠菌占20 株（54.1%）,在念珠菌中所占比例最高，与国内相关报道相似[8]。热带念珠菌6株（16.2%）、 光滑念珠菌7 株（18.9%）、克柔念珠菌2 株（5.4%）。四种念珠菌占鉴定总株数的94.6%。
已有文献指出，沙保罗培养基用于念珠菌菌检测容易造成漏检或误检[9]。本次研究发现有20株在念珠菌显色培养基受抑制的菌株在沙保罗琼脂培养基上有生长，经过API鉴定都为肠杆菌科的菌株。沙保罗琼脂培养基容易受到肠杆菌科的杂菌干扰造成假阳性的现象与黄晓燕等[10]的研究结果相符。从比较的结果可以看出，念珠菌显色培养基的选择性明显优于沙保罗琼脂培养基。
念珠菌生长较慢，传统的鉴定方法比较繁琐，需时较长且准确率不高，而采用API鉴定条等自动或半自动方法虽能将菌鉴定到种，但价格比较昂贵，不适合中小型医院及检验机构的大量使用。而本实验室研制的念珠菌显色培养基中含有多种酶底物，可分别与白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔氏念珠菌的不同酶类作用，从而呈现不同的颜色反应，达到在分离菌株的同时还可以对以上4种菌进行初步鉴别。与科玛嘉念珠菌显色培养基的比对显示两者的效果相当，均优于沙保罗琼脂培养基（不能区分念珠菌的各个种）。另外，显色培养基对念珠菌的初步鉴别需时约48h，而传统分离鉴定方法需要3～5天出报告，因而显色培养法能及时给临床治疗提供依据，对由念珠菌感染引起的疾病治疗具有重要意义，同时显色培养法鉴别符合率高，大幅度减少后续鉴定工作，而且该培养基制备简单，使用方便，价格相对便宜，适合在基层单位推广。
参考文献
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